中国实用口腔科杂志

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重组腺病毒载体Ad5-hOPG-EGFP转染的Beagle犬牙周膜细胞成骨能力研究

唐焜琪1闫福华2   

  1. 1.福建医科大学附属口腔医院牙周科,福建省高校口腔医学重点实验室,福州  350002;2. 南京市口腔医院,南京大学医学院附属口腔医院, 南京  210008
  • 出版日期:2015-12-15 发布日期:2016-01-06
  • 基金资助:

    高等学校博士学科点专项科研基金(20093518110002);江苏省双创计划引进人才基金(苏人才办[2014]27号);江苏省“六大人才高峰”高层次人才选拔培养项目基金(2013-SWYY-006);江苏省科技发展计划项目(BL2013002)

  • Online:2015-12-15 Published:2016-01-06

摘要:

目的    观察重组腺病毒载体 Ad5-hOPG-EGFP 转染 的Beagle 犬牙周膜细胞( PDLCs)体内和体外的骨化能力。方法    将体外构建的携带人骨保护素(human osteoprotegerin,hOPG)基因的腺病毒载体Ad5-hOPG-EGFP转染Beagle犬PDLCs,通过体外Von Kossa染色实验、实时荧光定量PCR检测成骨指标的表达情况、酶联免疫检测RANKL/OPG的值及裸鼠体内胶原膜成骨实验比较转染组和对照组的成骨能力。结果    组织学和形态学结果显示,转染了重组腺病毒Ad5-hOPG-EGFP的Beagle犬PDLCs形成的矿化结节数目多且体积大、深染。转染组中犬碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)基因相对表达水平均高于空载体组和空白对照组(P<0.05)。转染组中犬RANKL/OPG的值下降趋势最为明显。裸鼠体内实验中转染组胶原膜也体现出较好的成骨能力。结论    重组腺病毒介导的hOPG基因可以促进PDLCs成骨。

关键词: 牙周膜细胞, 骨保护素, 成骨能力

Abstract:

 Objective    To observe the osteogenesis of periodontal ligament cells (PDLCs) with human osteoprotegerin(hOPG) transfection in vivo and vitro. Methods    Ad5-hOPG-EGFP was constructed in vitro and transfected into canine PDLCs. Von Kossa staining, Real-Time PCR, ELISA and experiment in nude mice vivo were used to assess the osteogenic indices of hOPG-hPDLCs. Results    Morphologic and histological study demonstrated that hOPG-hPDLCs formed much more and larger mineralized nodules, and expressed higher level of alkaline phosphates(ALP)、osteocalcin(OC) and bone sialoprotein(BSP) (P < 0.05). RANKL/OPG ratio declined most in hOPG-PDLCs. Transfected collagen membrane group also reflected the better osteogenic ability in nude mice vivo experiment. Conclusion    OPG gene transfection can promote osteogenic ability of PDLCs.

Key words: periodontal ligament cells, osteoprotegerin, osteogenic ability